Tris(三羟甲基氨基甲烷)是一种常见的生物缓冲液,可用于整个DNA提取过程。从多种来源提取过程中,DNA对pH敏感。在细胞裂解,去除不需要的细胞成分和沉淀过程中,可以使用Tris来维持稳定的pH值。另外,它在细胞裂解中也起到特别重要的作用。
Tris保护DNA免受pH值变化的影响
TRIS可以保持稳定的pH值,pKa为8.1,有效缓冲范围值为7至9,由于其中性范围,Tris是生物学实验室中常用的缓冲液。当细胞分裂时,它们的DNA和内容物会溢出到缓冲液中。RNase A(破坏RNA),蛋白酶(破坏蛋白质)和SDS(十二烷基硫酸钠,溶解膜片段)这种细胞内含物以及片段化的RNA和蛋白质的汤对溶液的pH值有很大的影响。因为DNA对pH敏感,所以Tris缓冲并使pH保持稳定很重要。
Tris可促进细胞裂解
裂解或裂解细胞是DNA提取的第一步。这可以通过含有tris和EDTA(乙二胺四乙酸)的缓冲液来完成。EDTA结合二价阳离子(例如钙和镁)。由于这些离子有助于维持细胞膜的完整性,因此用EDTA消除它们会破坏细胞膜的稳定性。Tris是主要的缓冲组件,它的主要作用是将缓冲液的pH值维持在一个稳定的值(通常为8.0)。此外,Tris可能会与膜中的LPS(脂多糖)相互作用,从而进一步破坏膜的稳定性。
DNA必须在Tris缓冲液中才能使用
在DNA提取的最后阶段,从溶液中提取DNA本身。此时,DNA可溶于缓冲液中。为了从溶液中提取,可通过添加乙醇或异丙醇(异丙醇)使DNA不溶。完成此操作后,DNA会在溶液中以白色线状物质的形式出现。尽管可以以这种方式从剩余的细胞成分中分离出DNA,但是当DNA不溶时,它是“不可用的”。分离后,将酒精除去,必须将DNA放回生物缓冲液(如Tris)中才能使用。
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